2)第68章 巨大收益(求收藏,求追读)_从小镇做题家苟成大医
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  且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分……

  原理听起来颇为复杂,但其实真正要操作的时候,主要的步骤主要是以下几步。

  试剂准备,也就是让蛋白质跑的跑道,需要聚丙烯酰胺凝胶电泳来提供。

  然后是参赛的运动员,是把肿瘤细胞裂解之后,使得内部的蛋白质充分释放,然后制作了标准曲线。

  制作标准曲线之后,就可以让自己处理的细胞产生的‘运动员’开始上赛道了。

  紧接着是电泳、转模、免疫反应、显影等等一系列后,通过特殊的抗体和试剂,就能够显示目标蛋白的胶片。

  将胶片进行扫描或拍照,用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值……

  这个过程很复杂,也相对漫长,更需要耐心。

  不过,方子业反正已经下了门诊,来到实验室里,就一步一步地按部就班来做。且旁边还有洛听竹帮点小忙。

  最后呈现出结果后,洛听竹欣喜异常:“方师兄,你今天这个条带显示很清楚欸,上一次范师兄跑出来的是哑铃状的。”

  说完,她偏头看向方子业的成片,条带清晰、没有杂带、背景干净!

  “呈哑铃状一般配置胶有问题,另外还有一种可能是样品中含有太多杂质,没有离心下来,然后杂质沉积在孔的中间,蛋白自然被推挤到两边。”

  “配好胶,不合格的坚决不用,不要铤而走险。”方子业仔细想了一下原理,如此给洛听竹解释。

  “那如果有条带拖尾呢?”洛听竹想了一下,又问了一个问题,应该是她跟着别人做的时候,看到过这样的情况。

  “条带拖尾的话,一般是蛋白量浓度高或者,孵一抗浓度和时间太长。”

  “蛋白含量高的话,可能是前期的文献准备没有确定好,我认为最有可能的是因为一抗浓度太高,作用时间太长引起。”

  “当然也有其他原因。”方子业再次看了看自己的成片。

  HK2与β-actin(肌动蛋白)内参两个条带,共有过表达、正常以及沉默三个组。

  肿瘤细胞实验的内参,特别是涉及糖酵解通路的细胞实验内参,是不能选用常见的GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)的。

  “你这张图,直接用prism进行作图就可以用了吧?”洛听竹继续问。

  “应该差不多吧,条带的厚度灰度差距还是蛮明显的。拍个照,拍个照……”方子业赶紧让洛听竹也帮忙拍一张。

  洛听竹欣然答应,灵动得如同一只勤劳的小松鼠。

  而方子业此时,看着学识点飞速跳动到了134,一下子增加了足足七十点的学识点,也是知道啊,这一次的WB实验,在这一个课题之中的作用占比不小,可能是支撑整个课题规模的小骨架了。

  “这张照片拍得怎么样?”洛听竹拍完后,问方子业。

  方子业泛出姨母笑,而洛听竹则以为自己拍照的水平还不错,于是又咔咔地来了几张。

  然后就是清理实验台并清洗相应的实验器材了。

  一切结束,方子业建议:“洛师妹,辛苦了,一起去吃个宵夜吧?”

  洛听竹这会儿正在左右翻看着WB成图的照片,歪着头点了一下:“好呀。”

  ……

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